Mikroförökningsguide.

  Hem

Glasburkar

Det finns otroligt många och olika behållare som lämpar sig till att odla växter i. Syltburkar och barnmatsburkar är mycket bra. Det är viktigt att burken har en viss höjd, så att växten kan växa ordentligt. Dessutom ska glaset vara klart så att ljus kan nå in. Tänk på att det kan vara nödvändigt att krossa behållaren för att plocka ut växterna skonsamt.

Glasburkar med ett tunt aluminiumlock passar ypperligt för odling! Rengör dem så som du diskar vanliga köksredskap och avlägsna etiketter m.m..

Medium

Det är viktigt att de näringsämnen som växten behöver finns tillgängliga.

Ett medium som går under beteckningen P668 eller P6668 (även orchimax) är ett bra standardmedium för odling av flertalet tropiska epifyter (orkidéer). Innehåller inte hormoner. Använd detta slags medium för att plantera om explant som utvecklats (de får då bättre förutsättningar för att växa vidare). Mediet är också bra för omplantering av protokorm och omplantering av protokorm som är under utveckling.

Det sk. MS-mediet (obs. med mikronäringar och vitaminer) lämpar sig till många olika växter, men till halva koncentrationen. Innehåller normalt inte hormoner.

För att lyckas behövs oftast hormoner. Ibland måste det tillsättas. Hormonlösningar kan vara lite knepiga att få tag på men det finns ett medium som redan innehåller hormoner: P793.

Enklast är givetvis att beställa ett färdigt medium som är utvecklat specifikt för den växt som ska odlas men man kan lika gärna göra sin egna näringslösning.

Instruktion

Alla torra ingredienser utom agar vägs upp och hälls i en måttbehållare (1.0L volym). Bananen mosas (eller mixas) ordentligt och tillsätts också. Vatten fylls på upp till bägarens mått för 4 deciliter (dvs. inte 4 dl vatten eftersom bl.a. bananen har en viss volym) och blandningen rörs ihop till en jämn smet. Smeten hälls över till en värmetålig behållare. Ytterligare 6 dl vatten ska tillsättas; skölj ur alla smetrester med detta vatten och se till att allt "skölj" hamnar i den värmetåliga behållaren!

Blandningen hettas upp och hormonerna NAA och BA tillsätts. Agar tillsätts också. När agarn är löst är ditt medium färdigt att fördelas upp i mindre portioner.

Gjutning

De rengjorda glasburkarna ställs på rad och fylls upp till ett par centimeter med medium. Var försiktig så att burkarna inte vandrar iväg pga. den heta fyllningen.

Burkarna förseglas lätt med bomull och aluminiumfolie eller med skruvlock. Sätt gärna en aluminiumfolie över locket som en extra föriktighetsåtgärd. Skruva inte åt locken så att de sitter helt fast! Trycket kan bli alldeles för högt för glasbehållaren.

Sterilisering

Man kan antingen tryckkoka sina burkar (låt kokaren komma upp i tryck och stäng av) eller så kan man sterilisera dem i en vanlig ugn. Vid 130-150°C "bakas" burkarna i upp till 2-3 timmar. Riktigt åtsittande lock vid det senare förhindrar eventuell uttorkning av mediet.

Se samtidigt till att sterilisera vatten och instrument. Behållare fylls upp till ½-¾ av den totala volymen med vatten och tryckkokas eller bakas. Instrument som pincetter och stålpinnar slås in i aluminiumfolie eller placeras i en rostfri och luftsäker låda (matlåda?). Därefter tryckkokas eller bakas de.

Avsvalning

Medier som innehåller banan och aktivt kol kan skickta sig rätt regält (framförallt om bananen inte mosats så fint). Man kan behöva svänga runt behållare lite då och då innan mediet stelnat. När mediet börjat stelna bör man låta det vara i fred (agarlösningar stelnar vid runt 40°C). Burkarna kan placeras i en behållare, eller i en diskho, med kallt vatten; för att stelna fortare.

Välj växt - Ympa

Vissa växter är lättare att mikroföröka än andra. Saint Paula är en bra växt som lättare tar sig in vitro. Det gäller att prova sig fram. Använd saint paulians blad. Sterilisera bladet och lägg ett snitt vid mittnerven, placera bladet med snittytan skärandes en bit ner i mediet. En mindre utskuren bit av ett blad kan placeras liggandes på ett medium.

De bästa delarna att börja med från en orkidé är stängelnoder. Någon centimeter stängel lämnas på vardera sida om noden. Noden skalas ren från skyddande växtdelar och stängelbiten putsas så att ändkanter ser rena och hela ut (idén är att steriliseringen ska underlättas). Noden sticks ner i mediet så att noden precis är i överkant av mediets yta.

Sterilisering

Före en ympning (se ovan) måste explanten (dvs. växtdelarna) steriliseras. Om de inte är sterila eller om en illvillig liten organsim skulle lyckas ta sig in på annat sätt, blir troligtvis hela kulturen förstörd.

Apoteket säljer en väteperoxidlösning som i princip kan användas som den är. Man behöver inte skölja explantet med vatten efter en sterilisering med väteperoxid.

I livsmedelsbutiker (och lite var stans) kan man köpa vanligt blekmedel, klorin. Det verksamma ämnet är natriumhypoklorit och har den ungefärliga koncentrationen 5% i blekmedel. Man behöver bara 0.5-1%, vilket innebär att blekmedel måste spädas före användning. 1 del klorin till 5 delar vatten är lagom.

Tvätta först explanten försiktigt i lite vatten med diskmedel. Skölj inte och torka inte av. Diskmedlet gör steriliseringen effektivare!

Sterilisera i ca. 15 minuter.

Metoder för sterilarbete

Det finns mikrober nästan överallt i vår omgivning. Det är därför viktigt att jobba ytterst rent och se till att allt som kan komma i kontakt med mediet är sterilt. Man måste arbeta med en speciell metodik, ex. i ett omkullvält och steriliserat akvarium eller över ånga.

... läs om detta på sterilmetodik.

Låt det prunka in vitro

Efter en lyckad gjutning, sterilisering och ympning (dvs. att kulturerna är sterila; i.e. axena) märks burkarna med datum och vilken växt som odlas (eller med annan rolig, intressant och användbar information).

Kulturerna placeras under konstljus (speciella växtljus är givetvis ett plus).

Copyrights © Reserved Markus Axelsson, 2005.